经典名方竹叶石膏汤的物质基准量值传递分析
来源：《中草药》,52(11)
经典名方竹叶石膏汤的
物质基准量值传递分析
葛威，刘小康，王康宇，郭云龙，
蔡广知，赵跃刚通信作者，贡济宇通信作者
(长春中医药大学药学院)
竹叶石膏汤（ZhuyeShigaoDecoction，ZSD）源自东汉·张仲景《伤寒论》，具有丰富的临床应用基础，是国家中医药管理局发布的《古代经典名方目录（第一批）》所载方剂之一，由淡竹叶、石膏、麦冬、人参、甘草、半夏及粳米7味中药组成，具有清气分热、清热生津、益气和胃之功效，主治伤寒、温病、暑病余热未清，气津两伤证。其中，淡竹叶、石膏清热除烦为君药，人参、麦冬益气养阴为臣药，半夏降逆止呕为佐药，甘草、粳米调养胃气为使药。现代临床常将其用于治疗各种传染病热病。
经典名方是中医药数千年临床实践的结晶，具有组方合理、疗效确切、安全性高等特点，为中医药的精髓所在，然而研究成功的关键在于能否研制出符合质量要求的古代经典名方物质基准。ZSD中所含药味较多，化学成分复杂，在一些成分尚未明确的前提下，选择特征图谱、含量测定结合化学模式识别法能更好地评价其质量的一致性和优劣性，本实验以ZSD为研究对象，基于饮片-物质基准之间的量值传递开展研究，探寻ZSD中的关键质量属性转移规律，初步确定物质基准出膏率的质量控制范围、定量指标及其转移率范围，以期为石膏汤物质基准的质量控制及后续制剂开发提供借鉴。
1仪器与材料1.1仪器
LC-型高效液相色谱仪，包括DGC-20A型在线脱气系统，SIL-20A型自动进样系统，UV检测器，日本岛津公司；AB-S型十万分之一电子天平、AL型万分之一电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；KES-W22CSH型电陶炉，深圳市康佳智能电器科技有限公司；KQ-E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；SCIENTZ-12N型冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司；TGL16E台式高速冷冻离心机，长沙英泰仪器有限公司。
1.2试药
对照品异荭草苷、荭草苷、牡荆素，购自上海源叶生物科技有限公司，批号B、B、B75，质量分数均大于98%；对照品人参皂苷Rg1、Re、Rb1，购自中国食品药品检定研究院，批号-、-、-，质量分数依次为98.4%、97.4%、98.2%；对照品甘草苷、甘草酸、异甘草苷、甘草素，购自上海源叶生物技术有限公司，批号-15-5、-86-8、-86-9、-29-5，质量分数均大于98%；乙腈、磷酸、甲醇，ThermoFisher，色谱级；屈臣氏蒸馏水，广州屈臣氏食品饮料有限公司。
淡竹叶、石膏、麦冬（去心）、半夏、人参、甘草药材均来自神威药业集团有限公司，饮片均为实验室按照原方记载及相关法规炮制。各药材经长春中医药大学中药鉴定教研室蔡广知副教授鉴定，淡竹叶为禾本科淡竹叶属植物淡竹叶LophatherumgracileBrongn.的干燥茎叶，石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏GypsumFibrosum（主含CaSO4?2H2O），麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogonjaponicus(L.F)Ker-Gawl.的干燥块根，人参为五加科人参属植物人参PanaxginsengC.A.Mey.干燥根及根茎，半夏为天南星科半夏属植物半夏Pinelliaternate(Thunb.)Breit.的干燥块根，甘草为豆科甘草属植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根茎，质量均符合《中国药典》年版一部要求，粳米为河南大米；批号信息见表1。
2方法与结果2.1ZSD物质基准的制备
采用随机数表法，分别对方中各药味饮片进行随机组合，见表2。根据课题组前期考证，确定ZSD剂量为淡竹叶6g，石膏48g，麦冬31g，半夏12g，人参6g，甘草6g。
称取ZSD中各药味饮片于砂锅中，加入mL水，浸泡30min，电陶炉武火（W）转文火（W）煎煮至mL，目绢布滤过，滤液加粳米24g，煎煮70min，滤去粳米，调整体积至mL。滤液于真空冷冻干燥机中预冷冻后，冷冻干燥，即得20批ZSD物质基准样品。同法制备各单味药和阴性样品。
2.2ZSD物质基准特征图谱的建立
2.2.1色谱条件ThermoC18色谱柱（mm×4.6mm，5μm）；流动相为0.05%磷酸-乙腈，梯度洗脱：0～10min，5%乙腈；10～15min，5%～10%乙腈；15～25min，10%～19%乙腈；25～60min，19%～24%乙腈；60～65min，24%～30%乙腈；65～70min，30%～75%乙腈；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测波长nm；进样量20μL。
2.2.2对照品溶液的制备取异荭草苷、荭草苷、牡荆素、甘草苷、甘草素、异甘草苷、甘草酸对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成制成质量浓度分别0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.mg/mL的混合对照品溶液。
2.2.3供试品溶液的制备取ZSD冻干粉1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，密塞，称定质量，超声处理20min，放冷，称定质量，用80%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.4精密度考察取同一供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱方法重复进样6次，记录色谱图，以16号峰（甘草苷）为参照峰，计算各共有峰与参照峰的相对保留时间均小于0.62%，相对峰面积RSD值均小于4.82%，表明仪器的精密度良好。
2.2.5重复性考察取同一批ZSD物质基准，按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样检测，结果各共有峰与参照峰的相对保留时间的RSD值均小于1.28%，相对峰面积的RSD值均小于4.59%，表明该方法的重复性良好。
2.2.6稳定性考察取同一供试品溶液，分别于供试品溶液制备后0、4、8、12、24h，按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，结果各共有峰与参照峰相对保留时间的RSD值均小于1.03%，相对峰面积的RSD值均小于4.70%，表明供试品溶液在室温下24h内稳定性良好。
2.2.7特征图谱的建立及相似度评价取20批ZSD供试品溶液、混合对照品溶液、各单味药样品和阴性样品，按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录56min色谱图。使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版）”软件对20批物质基准进行图谱叠加得图1，并生成对照特征图谱，见图2。
将特征图谱进行特征峰归属，对应图谱见图3、4，全方共确定21个特征峰，经比对，其中峰5、9、12（异荭草苷）、13（荭草苷）、14（牡荆素）、17共6个共有峰属于君药淡竹叶；峰3、4、6、8、10、11属于臣药麦冬；峰1、2、7属于臣药半夏；峰15、16（甘草苷）、18、19（甘草素）、20（异甘草苷）、21（甘草酸）属于佐使药甘草。
20批ZSD物质基准（S1～S20）特征图谱与对照特征图谱相似度分别为0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.、0.，均大于0.90，结果表明，20批ZSD物质基准整体相似性均较好，说明ZSD物质基准的制备工艺稳定，所建立的ZSD物质基准特征图谱可用于评价方中药味质量传递规律。
2.2.8饮片-物质基准特征图谱的传递分析将各物质基准与其对应批次的各单味饮片的特征图谱分别导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（版），对相应特征峰进行标记峰匹配，计算相似度，结果淡竹叶和麦冬均大于0.，麦冬和半夏均大于0.，各单味药与物质基准中对应特征峰的相似度良好。结果表明，ZSD物质基准与饮片指纹图谱间的整体相似度良好，饮片中物质群向物质基准中传递较为稳定。
2.2.9主成分分析（principal
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